شمارش سلولی و بررسی درصد زنده بودن سلولها:
برای شمارش سلولی و تعیین درصد سلولهای زنده، از رنگ تریپانبلو استفاده گردید. به این ترتیب که سلول و رنگ به میزان مساوی با یکدیگر مخلوط شده، سپس به کمک لام هماسیتومتر، تعداد کل سلولها و درصد سلولهای زنده شمارش گردید.
هم چنین درصد سلولهای زنده با استفاده از رنگ PI (بیوساینس ـ آمریکا) و با روش فلوسایتومتری نیز ارزیابی گردید.
بررسی وجود سلولهای بنیادی هماتوپویتیک در سلولهای حاصل از جفت:
1- بررسی مارکرهای سطحی:
به منظور بررسی مارکرهای سطحی، سوسپانسیون سلولی حاوی 200000 سلول در 50 میکرولیتر آلبومین سرم گاوی تهیه و سپس به هر یک از لولهها، 5 میکرولیتر آنتیبادی مورد نظر و یا آنتیبادی ایزوتایپ کنترل اضافه شد. این مارکرها شامل CD34 ، CD133 و CD117 کونژوگه با PE (Phyco Erythrin) و مارکرهای CD45 و CD38 کونژوگه باFITC (Fluorescein Iso Thio Cyanate) بود.
همچنین از آنتیبادیFITC-IgG1 وPE-IgG1 به عنوان کنترل منفی استفاده گردید(تمامی آنتیبادیها از شرکت بیوساینس ـ آمریکا تهیه شد). سپس این لولهها در دمای یخچال به مدت 30 دقیقه انکوبه و بعد از سانتریفیوژ و دور ریختن مایعرویی، 100 میکرولیتر از محلول پارافرم آلدئید 1% به آن اضافه گردید و در نهایت توسط دستگاه فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت.
2- بررسی قدرت تولید کلونیهای خونساز:
به منظور بررسی وجود سلولهای بنیادی هماتوپویتیک با پتانسیل تولید ردههای مختلف خونی، پس از زدن کلاژناز، عبور از قیف و اضافه کردن بافر لیزکننده، 105 * 2 سلول با 1 میلیلیتر محیط نیمه جامد متیل سلولز(Methocult H4435 ، Stem cell technology و آمریکا) مخلـوط و در دمای اتاق به درون چاهکهای 2mm 35 ریخته شدند و برای 14 روز در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد و 5% 2CO قرار گرفتند. پس از این زمان، کلونیها به کمک میکروسکوپ لوپ(ژاپن، نیکون) بررسی و شمارش شد.
🦠اخبار علمی
👸🏻ریحانه انصاری
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
بررسی وجود سلولهای بنیادی مزانشیمی در سلولهای حاصل از جفت:
به منظور بررسی وجود سلولهای بنیادی مزانشیمی از سلولهای حاصل از بافت جفت، این سلولها در فلاسک 25 سانتیمتر مربع ریخته شده و به آن محیط DMEM غنی شده با 10% FBS اضافه شد(هر دو از BRL ، Grand Island ، NY ، آمریکا جیبکو) و در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد و 5% 2CO قرار گرفت. پس از 24 ساعت، تمامی سلولهای غیر چسبنده حذف و دوباره محیط کشت اضافه شد و بعد از آن هر سه روز یک بار تعویض محیط انجام شد. پس از مشاهده کلنیهای سلولی، سلولها به کمک آنزیم تریپسین از کف فلاسک جدا شده و به فلاسکهای بزرگتر منتقل شدند و بعد از پاساژ سوم سلولهای حاصل از نظر مارکرهای سطحی و قدرت تمایزی مورد بررسی قرار گرفتند.
🦠اخبار علمی
👸🏻ریحانه انصاری
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
بررسی مارکرهای سطحی :
بـرای بـررسی مارکرهـای سلولهای بنیادی مزانشیمی،
سلولها در پاساژ سوم، با تریپسین از کف فلاسک جدا شده و سوسپانسیون سلولی حاوی 200000 در آلبومین سرم گاوی تهیه شد. از این سوسپانسیون در چند لوله هر کدام به میزان 50 میکرولیتر ریخته شده و به هر یک از آنها 5 میکرولیتر آنتیبادی مورد نظر شامل CD34 ، CD105 ،CD73 ، CD166 (کونژوگه با PE) و CD45 ، CD90 و CD29 (کونژوگه با FITC) اضافه شد. از آنتیبادیهای FITC-IgG1 و PE-IgG1 نیز به عنوان کنترل منفی استفاده گردید.
2- بررسی پتانسیل تمایز به استخوان و چربی:
در پاساژ سوم، پتانسیل تمایز این سلولها به دو رده چربی و استخوان نیز مورد ارزیابی قرار گرفت. برای بررسی توانایی تمایز، تعداد 20000 سلول به هر چاهک پلیت 4 خانه منتقل و بعد از اتصال آنها به کف، محیط القاکننده به رده استخوانی و چربی به آن اضافه شد و هر سه روز یک بار و به مدت 21 روز با این محیطها تعویض محیط شد. محیط تمایزی چربی شامل دگزامتازون (250 نانومولار) و 3 ایزوبوتیل، 1- متیل گزانتین (5/0 میلیمولار)، محیط تمایزی استخوان شامل اسید اسکوربیک (50 میکروگرم در لیتر)، دگزامتازون(100 نانو مولار) و بتا گلیسرول فسفات(10 میلیمولار) میباشد. برای بررسی تمایز بعد از گذشت دوره 21 روزه، سلولها در کف فلاسک با پارافرمالدهید 4% فیکس، سپس از رنگ آلیزارین رد برای بررسی وجود رسوب کلسیم در تمایز استخوان و از رنگ اویل رد برای بررسی قطرات چربی داخل سلولی در تمایز چربی استفاده شد و با میکروسکوپ مورد مشاهده قرار گرفت.
یافتهها
با روش آنزیمی میتوان تعداد قابل توجهای از سلولهای تک هستهای زنده را از بافت جفت جدا کرد:
شمارش سلولی با تریپانبلو حکایت از آن داشت که 3 ± 90 سلول حاصل از هضم آنزیمی بافت جفت زنده میباشند. این درصد با رنگPI به 2 ± 89 درصد رسید. ایـن درصـد بـا توجـه بـه تقسیـم کـردن بافـت به قطعات
کوچک توسط تیغ و استفاده از آنزیم مطلوب میباشد.
🦠اخبار علمی
👸🏻ریحانه انصاری
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
بافت جفت حاوی سلولهایی با مارکرهای سلولهای بنیادی خونساز است:
آنالیز فلوسایتومتری سلولهای حاصل از بافت جفت بلافاصله پس از جداسازی این سلولها صورت گرفت و این سلولها از نظر مارکرهای رده خونی شامل CD34 ، CD45 ، CD133 ، CD117 مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج حکایت از آن داشت که در 5 نمونه، 8/0 ± 78/4% سلولها CD34+CD38- ، 6/0 ± 02/1% سلولها CD34+CD45+ ، 1/1 ± 1/2% سلولها CD133+CD45+ و 5/0 ± 16/1% سلولها CD117+CD45+ میباشند.
همچنین از سلولهای حاصل از جفت، 6/0 ± 02/6% CD34+ ، 8/0 ± 14/14% CD133+ و 4/0 ± 01/2% CD117+ بودند. طبق شکل 1 که در آن نتایج یک نمونه از 5 نمونه انجام شده دیده میشود، بیان مارکرها بر روی سلولهای بنیادی حاصل از جفت به شرح ذیل میباشد: (23/5%) CD34+CD38- ، (53/0%) CD34+CD45+ ، (4/2%) CD133+CD45+ و (77/0%) CD117+CD45+.
👸🏻ریحانه انصاری
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
سلولهای بنیادی خونساز حاصل از جفت پتانسیل تمایز به ردههای مختلف خونی را دارند:
نتایج سنجش کلونی نیز نشان از آن داشت که این سلولها توانایی تشکیل تمامی انواع کلونیهای خونساز شامل CFU - GEMM ، CFU - GM و CFU-E را دارا میباشند.
همان طور که در شکل 2 مشاهده میشود، کلونیهای خونساز اریتروییدی(CFU-E) درسمت چپ شکل، کلونیهای خونساز مخلوط ((CFU-GEMM در بخش میانی شکل و کلونیهای میلوئیدی- مونوسیتی (CFU-GM) در سمت راست شکل دیده میشوند.
میزان تشکیل ایـن کلونیها به ترتیب 2 ± 16 (CFU-GEMM) ، 3 ± 18 (CFU-GM) و 2 ± 7 (CFU-E) به ازای 105 × 2 سلول مشتق شده از بافت جفت بود.
👸🏻ریحانه انصاری
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
شب بخیر🌚💙
👸🏻غزل عبداللهی
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
حالت خوب نیست؟
پاشو اتاقتو تمیز کن.
پرده و پنجرهها رو باز کن.
یه دوش بگیر.
لباسهای تمیز بپوش.
یه کم از اتاقت بیا بیرون.
به خودت کش و قوس بده.
یه لیوان آب بخور.
تا زمانی که یه کم انرژیت بیشتره کارهای سختترتو حل کن و سنگهای جلوی پاتو بردار.
برای خودت هدف تعیین کن.
برای خودت توضیح بده که روزهای بد هم وجود داره و تو باید با قدرت بگذرونیشون🫧☁️
👸🏻سپیده اکرمی
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll
4.3M حجم رسانه بالاست
مشاهده در ایتا
👩⚕❤️
👸🏻سپیده اکرمی
🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس
🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه
♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2
#پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس
#دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه
#انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی
#قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی
https://eitaa.com/stem_cellll