#دومین_درسنامه 📕 #سطح_متوسط 📊 #پست_آموزشی_شماره 6⃣3⃣ ✔️شمارش سلولی:🔢🔬 🔹شمارش سلولی یا زنده مانی:  به هر روشی (لام هموسیتومتر یا دستگاه (شمارنده سلول) cell counter) که برای شمارش یا اندازه گیری تعداد سلول ها باشد،گفته می شود که در علوم زیستی از جمله تشخیص های پزشکی و درمانی مورد استفاده است. شمارش سلول زیر مجموعه مهم فلوسیتومتری بوده و کاربردهای آن در آزمایشگاه های تحقیقاتی و کلینیکال می باشد. 🔺+ بیشتر بدانید! لام هموسیتومتر: هموسیتومتر ابزاری برای محاسبه تعداد سلول های خونی است. توسط Louis-Charles Malassez اختراع شده و شامل یک اسلاید شیشه ای ضخیم برای بررسی میکروسکوپی با یک فرورفتگی مستطیل شکل هست که یک محفظه ای با حجم دقیق و معین ایجاد می کند. البته از لام هموسیتومتر فقط برای شمارش تعداد سلول های خونی استفاده نمی شود و کاربرد های متنوعی دارد. 🔸آماده سازی لام هموسیتومتر: 1⃣اگر از هموسیتومتر شیشه ای استفاده می کنید باید سطح آن را پیش از استفاده با الکل ضدعفونی کنید 2⃣اگر از هموستومتر یکبار مصرف استفاده می کنید نیازی به ضدعفونی نیست و فقط از بسته خارج و استفاده کنید مثل لام هموسیتومتر INCYTO DHC-N01 ◾️آماده کردن سوسپانسیون سلولی: 🔺+ تکنیک های ضدعفونی کننده از آلودگی محیط کشت سلولی و معرف ها توسط میکروارگانیسم ها جلوگیری می کند. 1⃣ فلاسک را به آرامی تکان بدهید (چرا؟!) تا مطمئن شوید سلول ها به طور مساوی در کل فلاسک توزیع و پخش شدند. 2⃣ بلافاصله پس از تکان دادن (بخاطر جلوگیری از چسبیدن سلول ها) با استفاده از یک پیپت استریل سوسپانسون سلولی را به داخل یک لوله اپندورف (Eppendorf) انتقال بدهید. 3⃣ ده میکرولیتر از سلول ها را درون یک تیوب جدید بریزید و 10 میکرولیتر از رنگ تریپان بلو 0.4% را اضافه و با آرامی مخلوط کنید. 👸🏻غزل عبداللهی 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

این همه ستاره تو آسمونه... یه جا کنار یکیشون واسه خودت انتخاب کن و برو به ستاره ها برس...⭐️✨ شبتون آروم🤍 👸🏻غزل عبداللهی 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

چیزهای خوب این دنیا بی پایان است همه کاری که باید انجام دهی این است که به خودت جرات کشف کردن آن ها را بدهی و روزت را با یک لبخند شروع کنی 📷 انگیزشی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

#پیشرفت_ایران_در_زمینه_سلول_بنییادی «ایران در تولید سلول های بنیادی از رتبه ۳۱ در چهار سال پیش به ۱۴ ارتقاء یافته است.»🇮🇷 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

مقدمه فراوانی کم سلول‌های بنیادی خونساز در خون بند ناف، مهم‌ترین فاکتور محدود کننده استفاده از این منبع در پیوند می‌باشد. اگر بتوان سلول‌های بنیادی خونساز و مزانشیمی موجود در جفت را جداسازی و به همراه سلول‌های خون بند ناف پیوند کرد، مشکل فراوانی کم سلول‌ها به دلیل افزایش تعداد اولیه سلول‌های بنیادی خونساز پیوندی و نیز لانه گزینی این سلول‌ها به واسطه همراهی سلول‌های بنیادی مزانشیمی مرتفع خواهد شد. لذا در این مطالعه سعی شد که با استفاده از روش آنزیمی، حداکثر سلول بنیادی خونساز و مزانشیمی موجود در بافت جفت استحصال و خصوصیات این سلول‌ها بررسی شود. مواد و روش‌ها در یک مطالعه تجربی، تعداد 5 نمونه بافت جفت مختلف را با آنزیم کلاژناز مجاور کرده و پس از حذف یاخته‌های سرخ آن با کمک بافر لیزکننده، سلول‌های باقی‌مانده از نظر وجود سلول‌های بنیادی خونساز و مزانشیمی بررسی شدند. یافته‌ها نتایج حکایت از آن داشت که 6/0 ± 02/6% سلول‌های استحصال شده، CD34+ و 8/0 ± 78/4% CD38-CD34+ بودند. این سلول‌ها، انواع کلونی‌های خونساز را تشکیل دادند و از کشت سلول‌های حاصل از جفت، سلول‌های چسبنده استرومایی با ویژگی سلول‌های بنیادی مزانشیمی به دست آمد. نتیجه گیری وجود تعداد قابل توجه سلول‌های CD34+ و مزانشیمی در بافت جفت، نشان می‌دهد که احتمالاً پیوند این سلول‌ها به همراه سلول‌های حاصل از خون بند ناف، در افزایش کیفیت پیوند مؤثر می‌باشد. 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

جداسازی و تعیین هویت سلول‌های بنیادی خونساز و مزانشیمی مشتق از بافت جفت انسانی مقدمه ‌ هر چند طی سال‌های گذشته، پیوند سلول‌های بنیادی خونساز، نقش مؤثری در درمان بیماری‌های مختلف به ویژه بدخیمی‌های خونی داشته است، اما محدودیت در یافتن منبع سلولی مناسب، این روش درمانی را با چالش مواجه کرده است. اگر چه سال‌ها، مغز استخوان و خون محیطی به عنوان دو منبع اصلی سلول‌های بنیادی خونساز برای پیوند به شمار می‌آمدند، اما محدودیت این منابع سبب شد تا منبع دیگری مد نظر قرار گیرد و بدین ترتیب استفاده از سلول‌های بنیادی خونساز خون بند ناف(UCB ، Umbilical Cord Blood) مطرح گردید(1). علی‌رغم مزایای زیاد این منبع سلولی که از آن جمله می‌توان به جمع‌آوری راحت و غیر تهاجمی و کاهش بروز واکنش پیوند علیه میزبان اشاره کرد، میزان کم سلول‌های بنیادی خونساز موجود در یک نمونه خون بند ناف اهدایی، مهم‌ترین فاکتور محدود کننده استفاده از این منبع سلولی به ویژه در گیرندگان بزگسالان می‌باشد به طوری که تعداد کم سلول‌های پیوند شده، جوابگوی نیاز بیمار برای تولید سلول‌های خونی نبوده و در مواردی تعداد نوتروفیل‌ها و پلاکت‌های تولید شده حتی بعد از گذشت ماه‌ها از پیوند، به تعداد مورد نیاز نرسیده است که این امر ممکن است منجر به افزایش عفونت و حتی مرگ گیرنده شود(3، 2). طی سال‌های اخیر استراتژی‌های مختلفی برای تکثیر این سلول‌ها به منظور افزایش تعداد اولیه آن‌ها برای پیوند مطرح شده است که از آن جمله می‌توان به تکثیر این سلول‌ها، در محیط دو بعدی کشت همراه با فاکتورهای رشد مختلف و یا کشت توام این سلول‌ها با سلول‌های مزانشیمی به عنوان فیدر، اشاره کرد(4). اما تکثیر بدون تمایز سلول‌های بنیادی خونساز در محیط دو بعدی کشت، با چالش جدی روبرو می‌باشد و این سلول‌ها در محیط دو بعدی کشت، در عدم همراهی آشیانه (نیچ) طبیعی خود به سرعت تمایز یافته و خصوصیات بنیادی خود را از دست می‌دهند(5). عدم موفقیت تکثیر سلول‌های بنیادی خونساز در محیط دو بعدی کشت به دلیل نبود نیچ یا ریز محیط مناسب، محققان را برآن داشت که به شبیه‌سازی ساختار نیچ در محیط آزمایشگاه بپردازند(7، 6). از آن جایی که سلول‌های بنیادی مزانشیمی یکی از مهم‌ترین سلول‌های تشکیل‌دهنده نیچ می‌باشند، از این سلول‌ها برای کشت توام استفاده گردید(8). اگر چه نتایج این مطالعه‌ها نشان از بهبود نسبی پیوند در مطالعه‌های بالینی دارد، اما این مقدار بهبود، چشمگیر نبوده و حاکی از عدم موفقیت این روش می‌باشد(10، 9). از دیگر راه‌کارها جهت افزایش تعداد سلول‌های بنیادی خونساز خون بند ناف، می‌توان به پیوند دو یا چند کیسه خون بند ناف اشاره کرد که اگر چه مشکل تعداد کم سلول را بر طرف خواهد کرد اما با مشکلات دیگری از جمله عدم تطابق کامل آنتی‌ژن‌های سازگار نسجی بین کیسه‌های پیوندی و گیرنده و افزایش امکان رد پیوند همراه می‌باشد(12، 11). بنابراین افزایش تعداد سلول‌های مفید برای خونسازی در صورتی موفق خواهد بود که سلول‌های اضافه شده از همان منبعی باشند که خون بند ناف از آن استحصال شده است. یکی از منابعی که می‌تواند به عنوان منبع مکمل سلول‌های خون بند ناف مورد توجه قرار گیرد، بافت جفت می‌باشد. بافت جفت دارای بافت همبند متراکم بوده و مملو از عروق می‌باشد. هر چند که مطالعه‌های کمی مبنی بر وجود سلول‌های خونساز در بافت جفت وجود دارد اما وجود این سلول‌ها در جفت موش و اخیرا در جفت انسان مورد مطالعه قرار گرفته است(14، 13). در این مطالعه سعی شد که کمیت و کیفیت سلول‌های بنیادی خونساز و هم چنین مزانشیمی موجود در بافت جفت انسانی مورد بررسی قرار گیرد. 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

جداسازی سلول از بافت جفت به روش آنزیمی: در این مطالعه که به صورت تجربی انجام گرفت، بافت جفت اهدایی از 5 دهنده مورد بررسی قرار گرفت. این نمونه‌ها از بیمارستان میلاد و با گرفتن رضایت‌نامه کتبی تهیه گردید. مقدار 20 گرم از بافت جفت در شرایط کاملاً استریل گرفته شده و در لوله فالکون حاوی PBS و آنتی‌بیوتیک پنی‌سیلین و استرپتومایسین ریخته شد. از این بافت میزان 5 گرم جدا شده، با تیغ به قطعات خیلی ریز تقسیم شد. سه بار با PBS شسته شده و به آن 50 میلی‌لیتر کلاژناز تیپIV به میزان 1/0% (وزنی ـ حجمی) اضافه گردید. این محلول به مدت 2 ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتی‌گراد قرار گرفت. سپس محلول فوق از گاز عبور داده شده و سوسپانسیون عبوری، 2 بار با PBS شسته شد(آنزیم و سایر مواد از جیبکو، آمریکا). پس از شستشو، به منظور حذف یاخته‌های سرخ از سوسپانسیون سلولی، از بافر لیزکننده یاخته‌های سرخ استفاده گردید. ابتدا پلیت سلولی در 1 میلی‌لیتر PBS به صورت سوسپانسیون درآمده، به آن 4 میلی‌لیتر محلول لیزکننده یاخته‌های سرخ اضافه گشت و به مدت 5 دقیقه در دمای 5 درجه سانتی‌گراد قرار گرفت. در نهایت این محلول با PBS شسته شد. بعد از این مرحله، توده سلولی سفید رنگی پدید آمد. 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

شمارش سلولی و بررسی درصد زنده بودن سلول‌ها: برای شمارش سلولی و تعیین درصد سلول‌های زنده، از رنگ تریپان‌بلو استفاده گردید. به این ترتیب که سلول و رنگ به میزان مساوی با یکدیگر مخلوط شده، سپس به کمک لام هماسیتومتر، تعداد کل سلول‌ها و درصد سلول‌های زنده شمارش گردید. هم چنین درصد سلول‌های زنده با استفاده از رنگ PI (بیوساینس ـ آمریکا) و با روش فلوسایتومتری نیز ارزیابی گردید. بررسی وجود سلول‌های بنیادی هماتوپویتیک در سلول‌های حاصل از جفت: 1- بررسی مارکرهای سطحی: به منظور بررسی مارکرهای سطحی، سوسپانسیون سلولی حاوی 200000 سلول در 50 میکرولیتر آلبومین سرم گاوی تهیه و سپس به هر یک از لوله‌ها، 5 میکرولیتر آنتی‌بادی مورد نظر و یا آنتی‌بادی ایزوتایپ کنترل اضافه شد. این مارکرها شامل CD34 ، CD133 و CD117 کونژوگه با PE (Phyco Erythrin) و مارکرهای CD45 و CD38 کونژوگه باFITC (Fluorescein Iso Thio Cyanate) بود. هم‌چنین از آنتی‌بادیFITC-IgG1 وPE-IgG1 به عنوان کنترل منفی استفاده گردید(تمامی آنتی‌بادی‌ها از شرکت بیوساینس ـ آمریکا تهیه شد). سپس این لوله‌ها در دمای یخچال به مدت 30 دقیقه انکوبه و بعد از سانتریفیوژ و دور ریختن مایع‌رویی، 100 میکرولیتر از محلول پارافرم آلدئید 1% به آن اضافه گردید و در نهایت توسط دستگاه فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت. 2- بررسی قدرت تولید کلونی‌های خونساز: به منظور بررسی وجود سلول‌های بنیادی هماتوپویتیک با پتانسیل تولید رده‌های مختلف خونی، پس از زدن کلاژناز، عبور از قیف و اضافه کردن بافر لیزکننده، 105 * 2 سلول با 1 میلی‌لیتر محیط نیمه جامد متیل سلولز(Methocult H4435 ، Stem cell technology و آمریکا) مخلـوط و در دمای اتاق به درون چاهک‌های 2mm 35 ریخته شدند و برای 14 روز در انکوباتور 37 درجه سانتی‌گراد و 5% 2CO قرار گرفتند. پس از این زمان، کلونی‌ها به کمک میکروسکوپ لوپ(ژاپن، نیکون) بررسی و شمارش شد. 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

بررسی وجود سلول‌های بنیادی مزانشیمی در سلول‌های حاصل از جفت: به منظور بررسی وجود سلول‌های بنیادی مزانشیمی از سلول‌های حاصل از بافت جفت، این سلول‌ها در فلاسک 25 سانتی‌متر مربع ریخته شده و به آن محیط DMEM غنی شده با 10% FBS اضافه شد(هر دو از BRL ، Grand Island ، NY ، آمریکا جیبکو) و در انکوباتور 37 درجه سانتی‌گراد و 5% 2CO قرار گرفت. پس از 24 ساعت، تمامی سلول‌های غیر چسبنده حذف و دوباره محیط کشت اضافه شد و بعد از آن هر سه روز یک بار تعویض محیط انجام شد. پس از مشاهده کلنی‌های سلولی، سلول‌ها به کمک آنزیم تریپسین از کف فلاسک جدا شده و به فلاسک‌های بزرگ‌تر منتقل شدند و بعد از پاساژ سوم سلول‌های حاصل از نظر مارکرهای سطحی و قدرت تمایزی مورد بررسی قرار گرفتند. 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌

بررسی مارکرهای سطحی : بـرای بـررسی مارکرهـای سلول‌های بنیادی مزانشیمی، سلول‌ها در پاساژ سوم، با تریپسین از کف فلاسک جدا شده و سوسپانسیون سلولی حاوی 200000 در آلبومین سرم گاوی تهیه شد. از این سوسپانسیون در چند لوله هر کدام به میزان 50 میکرولیتر ریخته شده و به هر یک از آن‌ها 5 میکرولیتر آنتی‌بادی مورد نظر شامل CD34 ، CD105 ،‌CD73 ، CD166 (کونژوگه با PE) و CD45 ، ‌CD90 و CD29 (کونژوگه با FITC) اضافه شد. از آنتی‌بادی‌های FITC-IgG1 و PE-IgG1 نیز به عنوان کنترل منفی استفاده گردید. 2- بررسی پتانسیل تمایز به استخوان و چربی: در پاساژ سوم، پتانسیل تمایز این سلول‌ها به دو رده چربی و استخوان نیز مورد ارزیابی قرار گرفت. برای بررسی توانایی تمایز، تعداد 20000 سلول به هر چاهک پلیت 4 خانه منتقل و بعد از اتصال آن‌ها به کف، محیط القاکننده به رده استخوانی و چربی به آن اضافه شد و هر سه روز یک بار و به مدت 21 روز با این محیط‌ها تعویض محیط شد. محیط تمایزی چربی شامل دگزامتازون (250 نانومولار) و 3 ایزوبوتیل، 1- متیل گزانتین (5/0 میلی‌مولار)، محیط تمایزی استخوان شامل اسید اسکوربیک (50 میکروگرم در لیتر)، دگزامتازون(100 نانو مولار) و بتا گلیسرول فسفات(10 میلی‌مولار) می‌باشد. برای بررسی تمایز بعد از گذشت دوره 21 روزه، سلول‌ها در کف فلاسک با پارافرم‌الدهید 4% فیکس، سپس از رنگ آلیزارین رد برای بررسی وجود رسوب کلسیم در تمایز استخوان و از رنگ اویل رد برای بررسی قطرات چربی داخل سلولی در تمایز چربی استفاده شد و با میکروسکوپ مورد مشاهده قرار گرفت. یافته‌ها با روش آنزیمی می‌توان تعداد قابل توجه‌ای از سلول‌های تک هسته‌ای زنده را از بافت جفت جدا کرد: شمارش سلولی با تریپان‌بلو حکایت از آن داشت که 3 ± 90 سلول‌ حاصل از هضم آنزیمی بافت جفت زنده می‌باشند. این درصد با رنگPI به 2 ± 89 درصد رسید. ایـن درصـد بـا توجـه بـه تقسیـم کـردن بافـت به قطعات کوچک توسط تیغ و استفاده از آنزیم مطلوب می‌باشد. 🦠اخبار علمی 👸🏻ریحانه انصاری 🎯استان هرمزگان/شهرستان بندرعباس 🏫دبیرستان دخترانه نمونه دولتی مهدیه ♻️پژوهشسرا ولایت ناحیه 2 #پژوهشسرا_ناحیه2_بندرعباس #دبیرستان_نمونه_دولتی_مهدیه #انجمن_علمی_پژوهشی_سلولهای_بنیادی #قطب_کشوری_سلولهای_بنیادی_و_پزشکی_بازساختی https://eitaa.com/stem_cellll ‌‌